Мой регион:
Ваш регион - ?
Да Нет
Войти через:

Сравнение терапевтического использования Risedronate и Calcarea phosphorica 6CH в восстановлении костной ткани у кастрированных крыс.Аллопатия против гомеопатии.

Сравнение терапевтического  использования Risedronate и Calcarea phosphorica 6CH в восстановлении костной ткани у кастрированных крыс.Аллопатия против гомеопатии.

Автор: Cristina WerkmanI; Giselle Segnini SenraI; Rosilene Fernandes da RochaII; Adriana Aigotti Haberbeck BrandãoIII

Год написания: 2006

Язык: Английский

Тематика: Гомеопатия и наука

Ссылка: Перейти

  • Текст
  • Перевод


Comparative therapeutic use of Risedronate and Calcarea phosphorica – allopathy versus homeopathy – in bone repair in castrated rats


Cristina WerkmanI; Giselle Segnini SenraI; Rosilene Fernandes da RochaII; Adriana Aigotti Haberbeck BrandãoIII

IMScs, Graduate Program in Oral Biopathology
IIPhD, Associate Professor
IIIPhD, Professor – Department of Biosciences and Oral Diagnosis, School of Dentistry of São José dos Campos, São Paulo State University



ABSTRACT

Osteoporosis, a disease characterized by progressive bone loss, has been the target of several studies in the past few years. It results in a much higher risk for fractures and might cause slower bone lesion healing. The aim of this work was to study the effects of Risedronate (allopathic medicine) and Calcarea phosphorica 6CH (homeopathic medicine) on the repair of bone lesions in male rats with osteoporosis induced by castration. Eighty-four three-month-old rats were used divided into four groups of twenty-one animals each. Three groups where castrated and one group was submitted to Sham surgery. One month later, cortical lesions were made in all animals' tibiae and, after one day, the different experimental treatments began according to the following groups: CR - castrated/Risedronate (1 mg/kg/day); CCp - castrated/Calcarea phosphorica 6CH (3 drops/day); CP - castrated/placebo and SP - Sham/placebo. The animals were sacrificed at seven, fourteen and twenty-eight days after the beginning of the treatments and had their tibiae removed. Digital radiographs of the tibiae were taken and analyzed in order to evaluate the optical density of the defect area. Then, they were decalcified and processed for histological and histomorphometrical analysis. The data were submitted to ANOVA, and to the Tukey and Dunnett tests (5%). The allopathic and homeopathic treatments led to different bone formation as regards remodeling and maturation aspects. Further research is necessary to access the resistance and quality of the newly formed bone.

Descriptors: Allopathy; Homeopathy; Calcarea phosphorica; Fracture healing.

RESUMO

A osteoporose, doença caracterizada pela perda de massa óssea, tem sido alvo de estudos nos últimos anos. Fraturas decorrentes da osteoporose são muito comuns e podem apresentar consolidação mais lenta. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito do risedronato (medicamento alopático) e da Calcarea phosphorica 6CH (medicamento homeopático) no reparo de lesões ósseas em ratos com osteoporose induzida por castração. Para tanto, foram utilizados oitenta e quatro ratos, com três meses de idade, separados em quatro grupos de vinte e um animais, sendo três grupos submetidos à castração e um grupo a falsa cirurgia ("Sham"). Um mês após a cirurgia, foram realizadas lesões corticais na tíbia de todos os animais e, a partir do dia seguinte, os tratamentos experimentais foram iniciados de acordo com os seguintes grupos: CR - castrado/risedronato (1 mg/kg/dia); CCp - castrado/Calcarea phosphorica 6CH (três gotas/dia); CP - castrado/placebo e SP – "sham"/placebo. Os animais foram sacrificados aos sete, catorze e vinte e oito dias após o início do tratamento e as tíbias foram removidas. Radiografias digitais foram realizadas e avaliadas para obter a densidade óptica na área do defeito. Em seguida, foram descalcificadas e processadas para análise histológica e histomorfométrica. Os dados foram submetidos a ANOVA e aos testes de Tukey e Dunnett (5%). Os tratamentos alopático e homeopático levaram a formação óssea de aspecto diferente considerando a remodelação e maturação. Mais pesquisas são necessárias para avaliar a resistência e qualidade do osso neoformado.

Descritores: Alopatia; Homeopatia; Calcarea phosphorica; Consolidação da fratura.





INTRODUCTION

Osteoporosis is a systemic disease, characterized by reduced bone mass and structural deterioration of bone tissue. It is considered a public health issue threatening a large portion of the population above 50 years of age7,13,19. Often presenting as a silent disease, it generally occurs asymptomatically and the afflicted individuals will be only diagnosed after the occurrence of some kind of fracture. One in two women and one in four men with age above fifty will have an osteoporosis related fracture in the course of their life7,13,19. The disease has a progressive course, with a tendency to entail fractures, and requires medical treatment1,3.

There are many options available to diagnose, treat and follow the progress of osteopenia and osteoporosis6,7,12. There are image-based exams that allow density quantification of trabecular and cortical bone in a restricted area or in the entire body; each one with a precise indication1,3,4.

Health professionals have been searching for substances that can help increase the density of osteoporotic bones. That can be achieved either by diminishing bone resorption or improving bone formation. Bisphosphonates are being used widely in diseases that present increase in bone resorption, such as senile or post-menopause osteopenia/osteoporosis. Studies indicate that they stimulate a higher bone density increase than other drugs used with the same purpose, such as raloxifene or calcitonin. Among bisphosphonates, risedronate shows a higher anti-resorptive effect2,3,8,14. Risedronate acts as an osteoclast inhibitor8,14. One hypothesis is that it prevents bone resorption by altering osteoclasts cytoskeleton's proteins or inhibiting cholesterol synthesis, which are necessary for the formation of the ruffled border, interfering directly with the fixation mechanisms of the osteoclasts to bone matrix3. The other hypothesis suggests that it induces the apoptosis of osteoclasts, by means of direct cytotoxic effects1.

In some bone diseases, alternative treatments other than the usual allopathic therapy have been used, including homeopathic treatments11.

Homeopathy proposes a new approach for comprehending and treating diseases, considering that a substance, once properly diluted and prepared, may induce symptoms that itself can alleviate. It defends cure by the similarity principle, presenting an antagonist ideology to conventional medicine which treats by the contrary law5,9,17. The goal of Homeopathy is to stimulate the body's own healing and defense mechanisms, leading its own cells to prevent and heal diseases5,18.

Calcarea phosphorica, formulated from calcium phosphate dilutions, is one of the homeopathic medicines prescribed for bone disease treatment17,18. Calcium phosphate, also known as hydroxyapatite, is the main structural component of bone matrix and comprehends around 85% of the body's phosphate9. Its homeopathic action heals several diseases related to the formation and remodeling of bone, therefore being prescribed for late bone callus formation, problems with fracture union, bone-deficient and abnormal growth, and for fractures followed by pain and paresis16,18. Its homeopathic cellular or functional mechanisms of action are still not documented, and even case reports based on clinical aspects are rare10.

Senra et al.15 (2004), while evaluating bone repair in hypertensive castrated rats treated with Risedronate, Calcarea phosphorica and Calcarea fluorica, observed that the animals treated with Calcarea phosphorica presented a higher optical density in the bone repair area than with the other treatments.

When a fracture or lesion occurs, the body mobilizes cells such as osteoclasts and osteoblasts to repair the injured bone. The osteoclasts absorb the necrotic bone and remodel the new bone created by osteoblasts that proliferate intensively and produce the new matrix. These cells work simultaneously forming an immature bone callus, which shows progressive remodeling until complete replacement by mature bone7.

In osteoporotic bones, the osseous turnover does not occur in an adequate way because in the remodeling process bone formation is diminished and resorption is increased19.

In spite of the vast research existing on the evolution and treatment of osteoporosis there are few studies evaluating the process of bone repair in osteoporotic individuals. The full impact of osteoporosis on the consolidation of bone fractures is still not completely understood, and it is possible that the drugs used for its treatment may interfere with the repair process. Thus, studies on alternative treatments for osteoporosis are necessary, valid, can contribute to a better understanding of the disease and may improve the quality of life of osteoporotic individuals. There are many alternative treatment options that could offer equivalent results, with less complications and side effects, which deserve to be explored in more depth.

The aim of this work was to study and compare the effects of the allopathic medication Sodium Risedronate and the homeopathic medicine Calcarea phosphorica 6CH on the bone repair of male castrated rats through histomorphological, histomorphometrical and bone optical density analyses.



MATERIAL AND METHODS

Sixty-three male rats, three months old, underwent castration, by testicle removal via scrotal bag, for osteoporosis induction, and twenty-one rats were submitted to Sham surgery. They were submitted to anesthesia using IM 2% xylazine hydrochloride (Rompun, Bayer, São Paulo, SP, Brazil) and ketamine (Dopalen, Agribrands do Brasil, Divisão Vetbrands Saúde Animal, Jacareí, SP, Brazil) (1:0.5 ml). One month later, all animals were operated to create a 3 mm cortical lesion on the medial face of the tibiae's proximal extremity, using a 2.5 mm trephine followed by a n. 8 carbide spherical burr. From the following day on, using mechanical restraint, the medication or placebo drops were orally given, according to the groups: Sham/placebo (3 drops/day of distilled water) (SP), castrated/placebo (3 drops/day of distilled water) (CP), castrated/Calcarea phosphorica 6CH (Pharmaciantiga, São José dos Campos, SP, Brazil) (3 drops/day) (CCp) and castrated/Sodium Risedronate (Hoechst, Suzano, SP, Brazil) (1 mg/kg in 3 drops/day) (CR).

On the 7th, 14th, and 28th day of treatment, the animals were sacrificed with anesthesia overdose and had their tibiae removed and radiographed using a CCD sensor from the direct digital system RVGui, version 5.0 (Trophy Radiology, Marnela-Vallée, France) connected to the 65kVp X-ray Gendex 765DC (Gendex Dental Systems, Dentsply International, Chicago, IL, USA). The images where analyzed by Image Tool (UTHSCSA Image Tool version 3.0) to assess the optical density and localization of the wounded area.

The material was then decalcified using Plank solution for a period of six months and submitted to histological processing. Semi-seriated, five-micron thick sections were stained with hematoxylin and eosin and submitted to morphological analysis. Histomorphometrical analysis to assess the percentage of bone formed on the lesional area was done using Image J software (http://rsb.info.nih.gov/ij) by overlaying a 72 points (300 by 150 pixel) grid onto the central area of the wound, which was the last area to repair in the lesion.

All data were submitted to ANOVA, and to Tukey and Dunnett tests (5%).



RESULTS

Through histomorphological and histomorphometric analyses it was possible to observe that by the 7th day all groups showed a great bone callus constituted by trabecular bone, filling the defect and extending into the medullary space; the CCp group showed a smaller callus than the other groups. By the 14th day the callus resorption was intense in the SP group and mild in the CCp and CR groups. By the 28th day of the repair process the bone was more mature and changing to a lamellar aspect. The CR group had the thickest callus with a great amount of bone of trabecular aspect filling the defect and still extending into the medullary space (Figure 1). The CCp group displayed a thin lamellar compact bone without trabecular aspect, with some areas tightly connected to the adjacent cortical (Figure 2). The CP and SP groups showed a thin sheet of trabecular bone with areas of lamellar aspect (Figures 3 and 4).

DISCUSSION

The greater bone quantity in the CR group evidences Risedronate's pharmacological effects, leading to the prevention of bone resorption also in the bone formed in the callus. The amount and morphologic aspect of bone observed in the CCp group indicates that bone formation occurred, but its resorption was not prevented by the Calcarea phosphorica treatment. Although Risedronate led to a greater quantity of bone formation, it maintained a trabecular aspect until the 28th day, while Calcarea phosphorica presented a remodeling that led to a more compact, lamellar, mature bone, similar to that of a normal cortical (Figures 1 and 2).

The small quantity of bone and the poor remodeling observed in the CP group was probably due to a response to castration allied to the placebo treatment, leading to a low bone formation and high resorption (Figure 3).

In the SP group, considered the normal control, the remodeling and maturation process was not complete, resulting in trabecular and lamellar bone formation (Figure 4).

Comparing the radiographic data with the histomorphological and histomorphometrical analyses, it became clear that not only the quantity but also the quality and density of bone interfere with the values as well as the fibrous tissue interposed in the radiographic images, contributing to the optical density variations observed.



CONCLUSION

The Risedronate treatment influenced repair, leading to a greater bone quantity than that induced with Calcarea phosphorica 6CH. However, the bone formed under the Risedronate treatment displayed a resistance to resorption, keeping its trabecular aspect, while the Calcarea phosphorica 6CH bone changed from an initially trabecular to a lamellar bone at the end of the experiment.

The allopathic and homeopathic treatments led to different bone formation results regarding remodeling and maturation aspects. Further research is therefore necessary to assess the resistance and quality of the formed bone.

Repair evaluation through optical density analysis does not faithfully describe the bone callus' morphological course because it does not consider the differences between the trabecular and lamellar bones and also because it adds the fibrous connective tissue to the measurements.



ACKNOWLEDGEMENT

We wish to thank the Coordination for the Improvement of Higher Education Personnel (CAPES) for financial support.



REFERENCES

1. Bae DC, Stein BS. The diagnosis and treatment of osteoporosis in men on androgen deprivation therapy for advanced carcinoma of the prostate. J Urol 2004;172(6 Pt 1):2137-44. [ Links ]
2. Blake GM, Fogelman I. Bone densitometry, steroids and osteoporosis. Curr Opin Nephrol Hypertens 2002;11(6):641-7. [ Links ]
3. Boonen S, Haentjens P, Vandenput L, Vanderschueren D. Preventing osteoporotic fractures with antiresorptive therapy: implications of microarchitectural changes. J Intern Med 2004;255(1):1-12. [ Links ]
4. Calero JA, Curiel MD, Moro MJ, Carrascal MT, Santana JS, Avial MR. Speed of sound, bone mineral density and bone strength in oophorectomized rats. Eur J Clin Invest 2000;30(3):210-4. [ Links ]
5. Fisher P, Scott DL. A randomized controlled trial of homeopathy in rheumatoid arthritis. Rheumatology (Oxford) 2001;40(9):1052-5. [ Links ]
6. Fogelman I, Ribot C, Smith R, Ethgen D, Sod E, Reginster JY. Risedronate reverses bone loss in postmenopausal women with low bone mass: results from a multinational, double-blind, placebo-controlled trial. J Clin Endocrinol Metab 2000;85(5):1895-900. [ Links ]
7. Guedes Junior FS. Osteoporose [Monografia de Especialização]. Vitória: Escola de Medicina da Santa Casa de Misericórdia de Vitória; 2003. [ Links ]
8. Harris ST, Watts NB, Genant HK, McKeever CD, Hangartner T, Keller M, et al. Effects of Risedronate treatment on vertebral and nonvertebral fractures in women with postmenopausal osteoporosis: a randomized controlled trial. Vertebral Efficacy With Risedronate Therapy (VERT) Study Group. JAMA 1999;282(14):1344-52. [ Links ]
9. Higdon J. Phosphorus. Oregon State University. Linus Pauling Institute. 2003. [cited 2004 Nov 17]. Available from: http://lpi.oregonstate.edu/infocenter/minerals/phosphorus. [ Links ]
10. Jobst KA. Homeopathy, Hahnemann, and The Lancet 250 Years On: a case of the Emperor's New Clothes? J Altern Complement Med 2005;11(5):751-4. [ Links ]
11. Jones JE, Kassity N. Varieties of alternative experience: complementary care in the neonatal intensive care unit. Clin Obstet Gynecol 2001;44(4):750-68. [ Links ]
12. Leder BZ, LeBlanc KM, Schoenfeld DA, Eastell R, Finkelstein JS. Differential effects of androgens and estrogens on bone turnover in normal men. J Clin Endocrinol Metab 2003;88(1):204-10. [ Links ]
13. National Osteoporosis Foundation [homepage on the Internet] [Cited 2004 Jun 20]. Available from: http://www.nof.org/osteoporosis. [ Links ]
14. Reginster J, Minne HW, Sorensen OH, Hooper M, Roux C, Brandi ML, et al. Randomized trial of the effects of risedronate on vertebral fractures in women with established postmenopausal osteoporosis. Vertebral Efficacy with Risedronate Therapy (VERT) Study Group. Osteoporos Int 2000;11(1):83-91. [ Links ]
15. Senra GS, Werkman C, Rocha RF, Brandão AAH. Estudo radiográfico do reparo ósseo em ratos SHR com osteoporose utilizando homeopatia e risedronato. In: Programas e Resumos da 5ª Mostra de pós-graduação da Universidade de Taubaté; 2004. Taubaté: Universidade de Taubaté; 2004. p. 306. outubro; Taubaté. [ Links ]
16. Tyler ML. Calcarea phosphorica. In: Tyler ML. Retratos de medicamentos homeopáticos. São Paulo: Santos; 1992. cap. 1. p. 181-7. [ Links ]
17. Ullman D. Homeopathic medicine: principles and research. In: Shoen AM, Wynn SG. Complementary and alternative veterinary medicine. Crawfordsville: R. R. Donnelley; 1998. p. 469-84. [ Links ]
18. Voisin H. Manual de matéria médica para o clínico homeopata. 2ª ed. São Paulo: Andrei; 1987. [ Links ]
19. Watts NB. Diagnosis and evaluation of patients with osteoporosis. South Med J 2004;97(6):540-1. [ Links ]

http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1806-83242006000300003

Перевод врача - гомеопата Евгении Соповой


РЕЗЮМЕ
Остеопороз, заболевание характеризующееся прогрессирующей потерей костной ткани, является объектом исследований в последние годы. Это заболевание ведет к более высокому риску переломов а так же к медленному заживлению пораженной кости. Целью данной работы было изучение влияния препаратов Risedronate (аллопатическая медицина) и Calcarea phosphorica 6CH (гомеопатическое лекарство) на восстановление поврежденных костей у самцов крыс с остеопорозом, вызванным кастрацией.
В эксперименте было использовано восемьдесят четыре трехмесячных самца крыс, которых разделили на четыре группы по двадцать одному животному в каждой. Использовались три группы кастрированных крыс и одна контрольная группа с имитацией вмешательства. Месяц спустя у всех животных был поврежден кортикальный слой большеберцовой кости.
Через один день начался эксперимент в соответствии со следующей схемой: CR - кастрированные / Risedronate (1 мг / кг / день); CCp - кастрированные / Calcarea phosphorica 6C Calcarea phosphorica 6CH (3 капли / день); СР - кастрированные / контрольные и SP – контрольные с имитацией хирургического вмешательства. Животных умерщвляли на седьмой, четырнадцатый и двадцать восьмой день после начала лечения c последующим удалением большеберцовой кости.
 С целью оценки оптической плотности поврежденной области были проанализированы цифровые рентгенограммы голени. Затем были взяты образцы декальцинированной ткани для гистологического и гистоморфометрического анализа . Для статистической обработки данных были использованы ANOVA, Тьюки и Dunnet тесты (5%). Аллопатическое и гомеопатическое лечение привело к различиям в остеогенезе, которые были проявлены в реконструкции и созревании костной ткани. Для изучения прочности и качества новообразованной кости необходимы дальнейшие исследования.


ВВЕДЕНИЕ
Остеопороз - системное заболевание, которое характеризуется снижением костной массы и деградацией костной ткани. Данное заболевание является проблемой для общественного здравоохранения и угрожает большей части населения старше 50 лет (7,13,19). Чаще всего болезнь протекает бессимптомно и диагностируется только после наступления различных переломов. У каждой второй женщины и каждого четвертого мужчины старше 50 лет переломы связанны с остеопорозом (7,13,19). Заболевание имеет прогрессирующее течение, влечет за собой переломы и требует медицинского лечения (1,3).
Существует много доступных методов диагностики, лечения и наблюдения за течением остеопороза и остеопении (6,7,12). Наибольшее распространение в диагностике остеопороза получила количественная компьютерная томография, которая позволяет оценить объемную минеральную плотность трабекулярного и кортикального вещества как на ограниченном участке скелета, так и во всем теле (3,4).
Врачи ищут вещества, которые могли бы помочь увеличить плотность костной ткани, пораженной остеопорозом. Это может быть достигнуто путем снижения резорбции кости или улучшением образования костной ткани. Максимальная потеря костной ткани отмечается в старческом возрасте и после наступления менопаузы у женщин. Для лечения этих состояний широко используются биофосфонаты. Исследования показывают, что они стимулируют увеличение плотности кости в сравнении с другими препаратами, используемыми с той же целью (например, ралоксифен или кальцитонин). Среди биcфосфонатов Risedronate показывает наиболее высокую антирезорбтивную эффективность (2,3,8,14). Risedronate действует как ингибитор остеокластов (8,14). По одной из гипотез он предотвращает резорбцию кости путем изменения белков цитоскелета – остеокластов или ингибирования синтеза холестерина, который необходим для формирования «гофрированного края», напрямую препятствуя механизму фиксации остеокластов в матриксе костной ткани (3). Согласно другой версии он индуцирует апоптоз остеокластов посредством прямого цитотоксического действия (1).
При лечении заболеваний костной ткани кроме аллопатической терапии использовались и альтернативные методы лечения, в том числе гомеопатическое лечение (11).
Гомеопатия предлагает новый подход к пониманию и лечению заболевания, учитывая, что только правильно приготовленное и разведенное вещество способно излечить симптомы, которые само же и может вызвать.  Она постулирует принцип подобия, в противоположность идеологии традиционной медицины, которая лечит  вопреки этому закону (5,9,17). Целью гомеопатии является стимулирование самоисцеления и развитие собственных защитных механизмов организма, что приводит к излечению заболевания (5,18).
Calcarea phosphorica изготавливается путем разведения фосфата кальция и является одним из гомеопатических препаратов, рекомендуемых для лечения заболевания костной ткани (17,18). Фосфат кальция, известный также как гидроксиапатит, является основным структурным компонентом костного матрикса, который содержит 85% фосфора всего организма. Его гомеопатическое действие направлено на исцеление болезней, связанных с формированием и восстановлением костной ткани, поэтому препарат назначается с целью образования костной мозоли; при проблемах сращения переломов, костных дефектах и аномалиях роста, при переломах, сопровождающихся болями и парезами (16,18). Клеточные или функциональные механизмы действия препарата все еще не исследованы, а отчеты о случаях, основанные на клинических проявлениях встречаются редко (10).
Senra с соавторами (2004), оценивая восстановление костной ткани у кастрированных крыс с повышенным артериальным давлением, получавших Risedronate, Calcarea phosphorica и Calcarea fluorica, отмечали, что у  животных, которых лечили Calcarea phosphorica наблюдалась более высокая оптическая плотность в области восстановления костной ткани, в сравнении с другими методами лечения (15).
При возникновении трещины или перелома организм мобилизует остеокласты и остеобласты с целью восстановления травмированной кости. Остеокласты абсорбируют некротизированные участки костной ткани, а остеобласты синтезируют и секретируют органический матрикс кости. Эти клетки работают одновременно, образуя незрелую костную мозоль, которая показывает постепенное исправление поврежденного участка, до полной ее замены зрелой костной тканью (7).
В костях, пораженных остеопорозом, обмен костной ткани не происходит должным образом, потому что ремоделирующие процессы формирования кости замедляются, а резорбция увеличивается (19).
Подавляющее большинство существующих научных изысканий посвящены изучению развития и лечения остеопороза, и имеется не так много исследований, оценивающих процесс восстановления костной ткани у людей, страдающих остеопорозом. Полное влияние остеопороза на процесс укрепления костной ткани после переломов костей еще не полностью изучено, и вполне возможно, что препараты, применяемые для лечения этого заболевания могут влиять на процессы восстановления. Таким образом, необходимы исследования альтернативных методов лечения остеопороза, что действительно может способствовать более глубокому пониманию болезни и может улучшить качество жизни людей, страдающих остеопорозом. Существует много альтернативных методов лечения, которые могли бы предложить аналогичные результаты, с меньшим количеством осложнений и побочных эффектов, и они заслуживают того, чтобы быть изученными более подробно.
Целью данной работы было изучение и сравнение эффектов, полученных от применения аллопатического лекарственного препарата Sodium Risedronate и гомеопатического средства Calcarea phosphoricа 6CH на восстановление костной ткани у кастрированных самцов крыс посредством гистоморфологического и гистоморфометрического методов исследований, а так же анализа оптической плотности костной ткани.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Шестьдесят три трехмесячных самца крыс подверглись кастрации, путем удаления яичка через мошонку, для вызова остеопороза, и двадцать одна крыса подвергалась имитации хирургического вмешательства. Операция была проведена с использованием анестезии: IM 2% ксилазина гидрохлорид (Rompun, Bayer, São Paulo, SP, Brazil) и кетамин (Dopalen, Agribrands do Brasil, Divisão Vetbrands Saúde Animal, Jacareí, SP, Brazil) (1: 0,5 мл). Через месяц все животные были прооперированы с целью создания 3-миллиметрового повреждения кортикального слоя на медиальной поверхности проксимального конечности голени, с использованием 2,5-миллиметрового трепанационного бура из карбидового сплава. Через один день, с помощью механического ограничителя было начато пероральное введение лекарств или капель-плацебо, в соответствии с группами: имитация хирургического вмешательства / плацебо (3 капли / день дистиллированной воды) (SP); кастрированные / плацебо (3 капли / день дистиллированной вода)(СР);кастрированные / Calcarea phosphorica 6С (Pharmaciantiga, São José dos Campos, SP, Brazil) (3 капли / день) (CCp) и кастрированные / Sodium Risedronate (Hoechst, Suzano, SP, Brazil) (1 мг / кг в 3 капли / день) (CR).
На 7-й, 14-й, и 28-й день лечения животных умерщвляли передозировкой анестезии, а большеберцовые кости удаляли для рентгенографического исследования с использованием CCD- сенсора системы RVGui, версия 5.0 (Trophy Radiology, Marnela-Vallée, France) подключенного к 65kVp рентгенаппарату Gendex 765DC (Gendex Dental Systems, Dentsply International, Chicago, IL, USA). Оценка оптической плотности костной ткани в зоне повреждения была проанализирована c помощью программы Image Tool (UTHSCSA Image Tool версия 3.0).
Затем материал был декальцинирован с помощью декальцинирующей жидкости в течении шести месяцев и отправлен на гистологическое исследование. Полутонкие срезы толщиной пять микрон окрашивали гематоксилин-эозином. Гистоморфометрический анализ процентного содержания образованной костной ткани на поврежденном участке был сделан с использованием программного обеспечения Image J (http://rsb.info.nih.gov/ij) путем наложения сетки из 72 точек (300х150 пикселей) на центральную область раны, которая была последней зоной восстановления в очаге поражении.
Для статистической обработки данных были использованы ANOVA, Тьюки и Dunnet тесты (5%).



РЕЗУЛЬТАТЫ
Гистоморфологический и гистоморфометрический анализ показали, что на 7-й день во всех группах большая костная мозоль состояла из губчатой костной ткани, которая заполнила дефект медуллярного пространства; в группе CCp наблюдали меньшую костную мозоль по сравнению с другими группами. К 14-му дню резорбция костной мозоли была интенсивнее в SP- группe и умеренной в CCp и CR группах. На 28-ой день процесс восстановления кости был более зрелым и перешел к пластинчатому аспекту. Группа CR имела толстую мозоль с большим количеством губчатой костной ткани в месте заполнения дефекта, которая простиралась в медуллярное пространство (рис 1). Группа CCp продемонстрировала тонкую пластинчатую плотную кость без трабекулярного аспекта, которая в некоторых зонах плотно прилегала к кортикальному слою. (Рис.2). В группах CP и SP наблюдали тонкий лист губчатой кости с участками пластинчатого аспекта (3 и 4).


кость 1.jpg

РИС.1 Морфологические аспекты наблюдений в группе получавшей Ризедронат, на 28 день лечения. Участок поражения закрыт большим количеством трабекулярной  костной массы не содержащей пластинчатого аспекта. * -вновь сформированная кость, В- прилегающий кортикальный слой, #-соединительная ткань. 



кость2.jpg


РИС.2 Морфологические аспекты, наблюдаемые в группе получавшей

Calcarea phosphorica 6CH, на 28 день лечения. Участок поражения

закрыт тонким слоем ламиллярной компактной костной ткани,

не содержащей трабекулярного аспекта.* -вновь сформированная

 кость, В- прилегающий кортикальный слой, #-соединительная ткань. 



кость 3.jpg

РИС.3 Морфологические аспекты наблюдений в группе получавшей

плацебо, на 28 день лечения. Участок поражения закрыт

трабекулярной и пластинчатой костной массой. * -вновь

сформированная кость, В- прилегающий кортикальный

слой, соединительная ткань.

.


кость4.jpg

РИС.4 Морфологические аспекты, наблюдаемые в плацебо группе

с имитацией хирургического вмешательства, на 28 день лечения.

Участок поражения закрыт трабекулярной и пластинчатой костной

массой. * -вновь сформированная кость, В- прилегающий

кортикальный слой, #-соединительная ткань.. 



кость 5.gif

ГРАФИК 1. Гистоморфологические результаты: график демонстрирует

количество сформированной костной ткани в зоне повреждения на

различных сроках исследования: 7,14 и 28 дней. SP-плацебо группа

с имитацией хирургического вмешательства, CP- плацебо/кастрир.,

ССр- калькарея фосфорика/кастрированные, CR – ризедронат/кастрир.



кость 6.gif

ГРАФИК 2. Результаты измерения оптической плотности

костной ткани: график демонстрирует оптическую плотность кости

в зоне повреждения на различных сроках исследования: 7,14 и 28 дней.

SP-плацебо группа с имитацией хирургического вмешательства, CP- плацебо/кастрир., ССр- калькарея фосфорика/кастрированные, CR – ризедронат/кастрированные. 

 

ОБСУЖДЕНИЕ

Большинство параметров костной ткани в CR-группе свидетельствует о том что фармакологический эффект Risedronate заключается в  предотвращении резорбции кости и образовании костной мозоли. Количество и морфологические аспекты костной ткани, наблюдаемые в CCp-группе указывают, что произошло формирование костной ткани, но лечение с помощью Calcarea phosphorica не предотвращало резорбцию. Хотя лечение Ризедронатом  привело к большему увеличению массы сформированной кости, при этом сохранялось присутствие  трабекулярной костной ткани вплоть до 28-го дня, в то время заживление под воздействием Calcarea phosphorica привело к развитию более компактной пластинчатой зрелой кости, аналогичной нормальному кортикальному веществу кости (рис 1 и 2).

В CP-группе наблюдалось медленное восстановление и небольшое количество костной ткани, вероятно, такой результат был обусловлен реакцией  на кастрацию в сочетании с эффектом плацебо, что привело к снижению процесса костеобразования и высокой резорбции (рис 3).

В SP-группе (контроль), процессы ремоделирования и созревания не были завершены, в результате чего трабекулярной и пластинчатый слои костной ткани еще формировались (рис 4).

При сравнении рентгенографических данных, результатов гистоморфологических и гистоморфометрических исследований, стало ясно, что не только количество, качество и плотность кости влияют на  значение, но также фиброзная ткань, отраженная в рентгенографические изображения, способствует изменению оптической плотности наблюдаемых вариантов.

 

ЗАКЛЮЧЕНИЯ

Лечение ризедронатом влияет на процессы восстановления в основном за счет увеличения количества костной массы, в сравнении с Calcarea phosphorica 6CH. Тем не менее, формирование кости под воздействием ризедроната демонстрирует устойчивость к резорбции, сохраняя ee трабекулярный аспект, в то время как Calcarea phosphorica 6CH изменила структуру кости от трабекулярной изначально к пластинчатой в конце эксперимента. 

Аллопатическое и гомеопатическое лечение привело к разным результатам костеобразования относительно аспектов восстановления и созревания костной ткани. Для оценки устойчивости и качества сформированной кости необходимы дальнейшие исследования. 

Оценка процесса восстановления посредством анализа оптической плотности недостаточно адекватно описывает морфологию костной мозоли, поскольку не учитывает различий между трабекулярным и пластинчатым слоями костей, а также потому, что учитывает в измерениях фиброзную соединительную ткань.

 

ЛИТЕРАТУРА

 

1. Bae DC, Stein BS. The diagnosis and treatment of osteoporosis in men on androgen deprivation therapy for advanced carcinoma of the prostate. J Urol 2004;172(6 Pt 1):2137-44.       

2. Blake GM, Fogelman I. Bone densitometry, steroids and osteoporosis. Curr Opin Nephrol Hypertens 2002;11(6):641-7.        

3. Boonen S, Haentjens P, Vandenput L, Vanderschueren D. Preventing osteoporotic fractures with antiresorptive therapy: implications of microarchitectural changes. J Intern Med 2004;255(1):1-12.       

4. Calero JA, Curiel MD, Moro MJ, Carrascal MT, Santana JS, Avial MR. Speed of sound, bone mineral density and bone strength in oophorectomized rats. Eur J Clin Invest 2000;30(3):210-4.      

5. Fisher P, Scott DL. A randomized controlled trial of homeopathy in rheumatoid arthritis. Rheumatology (Oxford) 2001;40(9):1052      

6. Fogelman I, Ribot C, Smith R, Ethgen D, Sod E, Reginster JY. Risedronate reverses bone loss in postmenopausal women with low bone mass: results from a multinational, double-blind, placebo-controlled trial. J Clin Endocrinol Metab 2000;85(5):1895-900. 

7. Guedes Junior FS. Osteoporose [Monografia de Especialização]. Vitória: Escola de Medicina da Santa Casa de Misericórdia de Vitória; 2003.      

8. Harris ST, Watts NB, Genant HK, McKeever CD, Hangartner T, Keller M, et al. Effects of Risedronate treatment on vertebral and nonvertebral fractures in women with postmenopausal osteoporosis: a randomized controlled trial. Vertebral Efficacy With Risedronate Therapy (VERT) Study Group. JAMA 1999;282(14):1344-52.       

9. Higdon J. Phosphorus. Oregon State University. Linus Pauling Institute. 2003. [cited 2004 Nov 17]. Available from: http://lpi.oregonstate.edu/infocenter/minerals/phosphorus.        

10. Jobst KA. Homeopathy, Hahnemann, and The Lancet 250 Years On: a case of the Emperor's New Clothes? J Altern Complement Med 2005;11(5):751-4.        

11. Jones JE, Kassity N. Varieties of alternative experience: complementary care in the neonatal intensive care unit. Clin Obstet Gynecol 2001;44(4):750-68.       

12. Leder BZ, LeBlanc KM, Schoenfeld DA, Eastell R, Finkelstein JS. Differential effects of androgens and estrogens on bone turnover in normal men. J Clin Endocrinol Metab 2003;88(1):204-10.       

13. National Osteoporosis Foundation [homepage on the Internet] [Cited 2004 Jun 20]. Available from: http://www.nof.org/osteoporosis.       

14. Reginster J, Minne HW, Sorensen OH, Hooper M, Roux C, Brandi ML, et al. Randomized trial of the effects of risedronate on vertebral fractures in women with established postmenopausal osteoporosis. Vertebral Efficacy with Risedronate Therapy (VERT) Study Group. Osteoporos Int 2000;11(1):83-91.       

15. Senra GS, Werkman C, Rocha RF, Brandão AAH. Estudo radiográfico do reparo ósseo em ratos SHR com osteoporose utilizando homeopatia e risedronato. In: Programas e Resumos da 5ª Mostra de pós-graduação da Universidade de Taubaté; 2004. Taubaté: Universidade de Taubaté; 2004. p. 306. outubro; Taubaté.       

16. Tyler ML. Calcarea phosphorica. In: Tyler ML. Retratos de medicamentos homeopáticos. São Paulo: Santos; 1992. cap. 1. p. 181-7.       

17. Ullman D. Homeopathic medicine: principles and research. In: Shoen AM, Wynn SG. Complementary and alternative veterinary medicine. Crawfordsville: R. R. Donnelley; 1998. p. 469-84.      

18. Voisin H. Manual de matéria médica para o clínico homeopata. 2ª ed. São Paulo: Andrei; 1987.      

19. Watts NB. Diagnosis and evaluation of patients with osteoporosis. South Med J 2004;97(6):540-1.       

 

 


Возврат к списку